份不同类型标本中人巨细胞病毒DNA的检出情况分析
刘孟涓，李秋红，李春莉△
重庆市妇幼保健院检验科
人巨细胞病毒(HCMV)属于β疱疹病毒亚科，人群中HCMV的感染非常普遍，根据感染时间可分为先天感染和后天感染[1]，临床症状包括肝脾肿大﹑淤斑或紫癜﹑黄疸、血小板减少和肺炎、中枢神经系统异常等[2-3]。尤其对免疫功能低下的人群，如孕妇、婴幼儿等危害更为严重[4]。因此，早期诊断和治疗对疾病的控制和预后有着重要意义。目前HCMV感染诊断的常用实验室证据主要是标本中HCMVDNA的检出[5-6]。HCMVDNA可从多种体液标本中检出，而且在不同人群中存在不同的特点。
本研究对孕妇乳汁、羊水，脐血、全血、血清、尿液及婴儿全血、血清、母亲乳汁、尿液和脑脊液的HCMVDNA检出情况进行了回顾性分析，观察了不同人群的不同类型标本中，HCMVDNA检出情况的差异，旨在为临床检测标本的选择提供参考依据，以尽早有效地检出HCMVDNA。
1资料与方法1.1一般资料
将年5月至年7月于本院检验科进行了HCMVDNA实时荧光定量PCR检测的疑似HCMV感染的孕妇和婴儿共例纳人研究，疑似感染的判断依据为《孕妇及新生儿巨细胞病毒感染预防、诊断和治疗共识解读》[7]。
其中，孕期超声检查出现宫内感染相关的声像异常，如脑室增宽、颅内钙化、小头畸形、胎盘增厚等的孕妇共例，年龄20～42岁，年龄中位数为29岁，20～35岁例，35～42岁86例。
血清HCMVIgGU/mL且出现疑似HCMV感染的相关症状，如反复黄疸、消退延迟、肝功能受损或疑似HCMV肺炎等的婴儿共例，男婴例，女婴例，婴儿年龄:0～6个月，年龄中位数为9d，新生儿(28d)例，28d至6个月婴儿例。
共收集上述人群进行HCMVDNA检测的临床标本共份，包括全血份、血清份、尿液份、母亲乳汁份、羊水份、脐血5份和脑脊液1份。
1.2仪器与试剂
核酸扩增仪采用美国PE公司的ABI7型实时荧光定量PCR仪。HCMVDNA检测试剂盒购自湖南圣湘公司。
1.3方法
采集患者静脉血标本2mL于乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝管或无抗凝剂管，血清标本需r/min离心5min分离备用。清洁中段尿、乳汁需采集2mL以上于带盖无菌杯中。羊水标本需采集10mL至无菌离心管。
脑脊液标本需采集lmL至无菌试管中。所有标本立即送检或置于4℃保存不超过24h。所有实验操作严格按照试剂盒说明书进行。按说明书要求进行结果判读:Ct≤39且扩增曲线呈明显S型为HCMVDNA阳性。
1.4统计学处理
使用SPSS17.0软件进行统计学处理，检出率以百分数表示，检出率的比较采用χ2检验，P＞0.05为差异有统计学意义。
2结果2.1不同人群HCMVDNA检出率的比较
2.1.1孕妇本研究的例疑似HCMV感染孕妇中﹐HCMVDNA的总检出率为3.80%(24/);其中，20～35岁孕妇HCMVDNA的检出率为3.85%(21/)，35～42岁孕妇的检出率为3.49%(3/86)，两个年龄段的孕妇检出率比较差异无统计学意义(χ2=0.，P=0.)。
2.1.2婴儿本研究的例疑似HCMV感染婴儿中，HCMVDNA的总检出率为9.63%(/)；其中，男婴和女婴的检出率分别为8.46%(67/)、10.97%(76/)，两者比较差异无统计学意义(χ2=2.，P=0.);新生儿(28d)HCMVDNA检出率为7.05%(94/)，28d至6个月的婴儿检出率[32.45%(49/)]明显高于新生儿，差异有统计学意义(χ2=.，P0.)。
2.2不同类型标本HCMVDNA检出率的比较
份标本HCMVDNA的总检出率为8.65%(/)。其中，全血、血清﹑尿液﹑乳汁﹑羊水，脐血和脑脊液标本的检出率分别为5.08%(18/、2.28%(27/)、6.82%(27/)、78.49%(/)、1.17%(4/)、20.00%(1/5)、0(0/1)。乳汁的检出率高于其他类型的标本(P≤0.05)。
在新生儿(28d)的标本中，母亲乳汁的HCMVDNA检出率也最高，为78.70%，其次为全血，两者比较差异有统计学意义(χ2=.，P0.)，脑脊液标本仅有1份且未检出HCMVDNA。28d至6个月婴儿相关标本中，母亲乳汁的检出率仍为最高，其次是尿液标本，两者差异也有统计学意义(χ2=45.，P0.)。除母亲乳汁外，其余3种类型标本的检出率在两个年龄段的婴儿间差异均有统计学意义(P≤0.05)。见表1。
孕妇的标本中，无论是＜35岁还是≥35岁孕妇，乳汁的检出率均为最高。从孕妇的总体检出率看，乳汁的检出率也远高于其他类型的标本，其次为脐血，两者间的差异有统计学意义(χ2=80.，P0.)。见表2。
2.3同一婴儿或孕妇采集的不同类型标本的HC-MVDNA检出率比较
2.3.1婴儿尿液、血清﹑母亲乳汁标本检出率的比较本研究中，38例婴儿采集了尿液、血清及母亲乳汁等不同类型的标本进行HCMVDNA检测。检出率:母亲乳汁89.47%(34/38)，尿液18.42%(7/38)，血清18.42%(7/38)。母亲乳汁和尿液、血清标本的检出率比较，差异有统计学意义(χ2=31.，P0.)。
其中﹐有28例婴儿母亲乳汁标本HCMVDNA阳性，但血清和尿液标本均未检出HCMVDNA。有6例婴儿母亲乳汁HCMVDNA阳性，同时血清和尿液标本HCMVDNA也为阳性。另有1例婴儿母亲乳汁中未检出HCMVDNA，但血清和尿液中均检出HCMVDNA。同一婴儿采集不同类型标本，母亲乳汁的检出率仍为最高，但母亲乳汁中是否检出HCMVDNA并不能完全反映婴儿体液标本的检出情况。见表3。
2.3.2母亲血清和乳汁标本的检出率比较本研究中，有22例婴儿检测母亲乳汁HCMVDNA的同时，对其母亲血清也进行了检测，母亲乳汁和血清的检出率分别为86.36%(19/22)，0(0/22)。19例乳汁阳性的乳汁和血清HCMVDNA均为阴性，提示血清HCMVDNA阴性的孕妇不能排除HCMV的感染。
2.3.3孕妇羊水和尿液标本的检出率比较本研究中，有19例孕妇同时抽取了羊水和尿液标本进行HCMVDNA的检测，检出率分别为10.53%(2/19)、0.53%(2/19)，两者比较差异无统计学意义(P0.05)。
3讨论HCMV的感染在我国越来越受到重视，尤其对于免疫功能低下的孕妇和婴幼儿群体，可能造成较为严重的后果。感染发生在妊娠时，可能会造成胎儿各方面的损害[7-8]。因而尽早检出HCMV对感染的控制和预后有重要意义。由于不同年龄段人群的不同生理特点,不同类型的标本中，HCMVDNA的检出率存在一定差异。
本研究中,例孕妇的HCMVDNA总体检出率为3.80%。高龄孕妇(≥35岁)与35岁以下孕妇之间无明显差异。例0一6个月内的婴儿的HCMVDNA总体检出率为9.63%,不同性别婴儿的检出率也没有明显差异。
本研究发现，无论是婴儿还是孕妇,不同年龄段的孕妇或婴儿的各种不同类型的标本中,乳汁的检出率都显著高于其他类型的标本，且不同年龄段间无明显差异。这为临床早期检测HCMVDNA的标本选择提供了新的参考依据。
本次研究的0一6个月婴儿的标本中，母亲乳汁检出率最高，其次为尿液标本，均高于血液中的检出率。这可能与HCMV的嗜上皮特性有关。但之前类似的研究中，付慧[9]发现50例HCMV感染的新生儿中，尿液的检出率(56.00%)显著高于母亲乳汁(36.00%)和血清(34.00%)。江丽莉等[10]发现例0至6个月疑似HCMV感染的婴儿中，尿液的检出率(71.40%)高于母亲乳汁(68.40%)和血液(58.10%)。这可能与此前的研究中病例数量和标本数量相对较少有关。但江丽莉等[10]也发现新生儿组母亲乳汁的阳性率最高，为91.70%。这与本次研究的结果一致。根据两个年龄段婴儿的各类标本检出率进行分析，除母亲乳汁外，尿液、全血、血清这3种标本的检出率都是随婴儿年龄增加而增高。这可能与婴儿出生后接触到的各种感染途径增多有关，也与婴儿自身的生理发育特点有关。
从新生儿的生理特点来看新生儿时期的肾脏浓缩功能还没有发育健全，即使母亲乳汁中可检出HCMVDNA，但在患儿尿液中却不一定能够检出。但随着年龄增长，婴儿肾脏浓缩功能逐渐发育健全后﹐尿液检出率开始逐渐增高[11]。这也说明新生儿尿液标本HCMVDNA阴性时，临床上也不能完全排除HCMV感染。
由于排尿的间歇性，建议可分时段多次采集婴儿尿液进行检测以减少漏检率[12]。本次研究中还发现有28例母乳喂养的婴儿，母亲乳汁中均检出了HCMV，但婴儿血、尿标本中却均未检出。虽然之前的研究显示，乳汁HCMVDNA阳性的母亲通过母乳喂养导致婴儿患病的概率为68.10%，但仍需避免因标本选择造成的假阴性而影响诊断[13]。
因此对临床高度疑似HCMV感染的新生儿，若婴儿血、尿中均未检出HCMVDNA，需同时结合其母亲乳汁标本的检测结果进行分析判断，以避免漏检。
本次研究发现孕妇的标本中，乳汁的HCMVDNA检出率也最高，为78.95%。但孕妇其他类型标本的检出率却远低于乳汁。如本次研究中孕妇血清的检出率为0，羊水的检出率仅1.17%，脐血因标本量太少只有5份，检出了1份。李东明等[13]报道例进行产前诊断的孕妇中，羊水和脐血HCMVDNA的检出率很低，分别为0.49%、0.34%。这可能与人体不同部位体液的病毒载量差异有一定关系。
此前的研究表明健康成年女性中，持续性的HCMV感染可存在于乳腺上皮细胞中，即乳腺上皮细胞是HCMV持续感染的宿主细胞。虽然HCMV能够感染人体多个器官，包括唾液腺、肺、胃肠道、肾脏、肝脏﹑脾脏和大脑，但是由于母乳是该病毒的主要传播途径，HCMV基因产物在正常乳腺上皮中的表达可能包含了病毒生命周期的关键组成部分[14]。
这也从一定程度上解释了HCMVDNA在乳汁中的检出率显著高于其他体液标本的原因。由于母乳喂养是新生儿感染HCMV最常见的一个途径，因此临床上对于疑似HCMV感染母亲的乳汁需经过处理后才能用于喂养婴儿，以避免母乳喂养途径的病毒传播[15]。
有文献报道，外周血并非HCMV感染者的常规排毒部位，病毒载量往往也与疾病的播散性和严重度有关[14]。本研究发现，19例母亲乳汁阳性的婴儿，但其母亲血清标本中均未检出HCMVDNA。相反，未发现乳汁阴性而母亲血清阳性的情况。再次证明，同时采集两种标本，HCMVDNA在乳汁标本中的检出率普遍高于血清。
另外，随着婴儿年龄增长，婴儿血清HCMVDNA的检出率增加最为明显，这可能与血清中HCMV出现时间较晚有关[16]。因此，有学者建议将血清作为HCMV治疗监测的一项指标，对临床疗效监测方面的参考意义较大[17]。综上所述，本次研究发现，婴儿的各类标本中，无论来自新生儿还是28d至6个月婴儿，母亲乳汁的HCMVDNA检出率明显高于其他类型的标本。孕妇的各类标本中，无论是＜35岁还是≥35岁孕妇，乳汁标本的HCMVDNA检出率也显著高于其他类型的标本。
因此对于血、尿HCMVDNA阴性而又高度疑似HCMV感染的母婴患者，建议通过检测乳汁而进一步明确诊断。检出率高的乳汁标本还具有采集简便、无创伤等优势，易被患者接受，值得临床上推广应用，同时也可用于指导婴儿喂养方式，对预防婴幼儿HCMV感染有着重要意义。
参考文献
[1]HAMELEM,FLANAGANR,LOOMISCA,etal.Severemorbidityandmortalitywithbreastmilkassociatedcytomcga-lovirusinfection[J].PediatricInfectDisJ,,9(1):84-86.
[2]KORNDEWAL，MJ,OUDESLUYSMURPHYAM，ACMK,etal.Congenitalcytomegalovirusinfection:Childdevelop-ment,qualityoflifeandimpactondailylife[J].PediatInfectDisJ,,36(12):-.
[3]朱玉,薛露,王珥,等.婴儿巨细胞病毒感染相关血液系统损害的临床特点[J].中国小儿血液与肿瘤杂志,,23(2):99-.
[4]姜毅,张小娇.孕妇及新生儿巨细胞病毒感染预防、诊断和治疗共识解读[J门.中国新生儿科杂志，,33(3):-.
[5]JOHNSONJ,ANDERSONB,Screening,prevention,andtreatmentofcongenitalcytomegalovirus[J].ObstetGyne-colClinNorthAm,,41(4):-.
[6]KWONS,JUNGBK,KOSY,etal.ComparisonofquantitationofcytomegalovirusDNAbyrealtimePCRinwholebloodwiththecytomegalovirusantigenemiaas-say[J].AnnLabMed,,35(1):99-.
[7]唐华.人巨细胞病毒感染的实验室诊断技术研究进展[J].现代医药卫生,,31(3):-.
[8]喻欢,黄悦,卫飞雪,等.新生儿先天性巨细胞病毒感染的研究进展[J].中国妇幼保健,,33(14):-.
[9]付慧.不同标本巨细胞病毒DNA检测在新生儿巨细胞感染中的应用[J]现代临床医学,,44(4):-.
[10〕江丽莉,裴立红,余璟璐,等.婴儿尿液、血液﹑配对母乳人巨细胞病毒DNA的检测结果分析[J].中国卫生检验杂志,,8(29);-.
[11]鱼丽娟﹐张琳﹐曹三成.婴幼儿血、尿HCMV-DNA检测在HCMV感染诊断治疗中的应用[J].检验医学与临床，,13(6):-.
[12]张丽科﹐陈倩倩﹐余学高﹐等.血液和尿液中巨细胞病毒DNA的检测研究[J].国际检验医学杂志,,39(2):-.
[13]李东明,佘尚扬,陈巧佩,等.广西地区孕妇巨细胞病毒感染产前筛查与产前诊断分析[J].中国优生与遗传杂志，,26(7):74-75.
[14]HARKINSLE,MATLAFLA,SOROCEANUL,etal.Detectionofhumancytomegalovirusinnormalandneoplas-ticbreastepithelium[J.Herpesviridae,,1(1):8.
[15]SAMSs,INGERSOLLJ,RACSALD,etal.Long-termstabilityofCMVDNAinhumanbreastmilk[J].JClinVirol,,(1):39-41.
[16]中华医学会儿科学分会感染学组.儿童巨细胞病毒性疾病诊断和防治的建议[J].中华儿科杂志﹐,50(4):-.
[17]姚丽,张梅,郭先成.孕妇巨细胞病毒感染载量与胎儿宫内感染的相关性分析[J].医院感染学杂志,,25(15):-.
来源：《检验医学与临床》杂志
编辑：姜旭
审阅：笪文武
预览时标签不可点收录于话题#个上一篇下一篇